Training tuberculosis laboratory workers in LED-fluorescence microscopy: experience learned in Argentina / Capacitación de trabajadores de laboratorios de tuberculosis en microscopia de fluorescencia LED: experiencia en Argentina

ABSTRACT Objective To assess a LED-fluorescence microscopy (LED-FM) capacitation program for the training of laboratory technicians without previous experience in FM. Methods We evaluated a teaching program that consists of a three-day course followed by an "in situ" two-month phase in which technicians acquired skills without the help of a FM expert; in order to gain confidence to recognize auramine-stained bacillus, during this phase, technicians examined duplicate slides stained by Ziehl Neelsen (ZN) and FM in a unblinded way. Technicians with acceptable performance, continued with a blinded-training period. Testing panels and rechecking process were used to evaluate proficiency after different length of experience. Results Post-course panel results showed that 70% of trainees made Low False Positive errors (LFPs). Analysis of two other panels showed that LFPs significantly decreased (Chi-squared test, p<0.05) as the "in situ" training phase progressed. Processing at least three slides/day was associated with acceptable performance. During the blinded-training period, results of the rechecking process showed that sensitivity (96.8%) and specificity (99.8%) levels were satisfactory. Conclusion Moderate training (a three-day course) is not enough to make technicians proficient in LED-FM; however, great ability can be reached after a short "in situ" training phase even without the presence of experienced staff available in field to review doubtful results. Training was more effective in services with a minimum workload of 750 slides/year.(AU)

RESUMEN Objetivo Evaluar un programa de capacitación en microscopía de fluorescencia LED (MF-LED) para el entrenamiento de técnicos de laboratorio sin experiencia en MF. Métodos Se evaluó un programa de capacitación que consiste en un curso de tres días seguido de dos meses de entrenamiento «in situ¼, en donde los técnicos adquirieron habilidades sin presencia de un experto en la práctica diaria; para alcanzar confianza en el reconocimiento del bacilo, los técnicos, durante estos meses, examinaron en forma «no cegada¼ extendidos duplicados teñidos por Ziehl Neelsen (ZN) y MF. Aquellos laboratoristas que lograron rendimiento aceptable continuaron su entrenamiento «a ciegas¼. Su desempeño fue evaluado en distintos períodos del entrenamiento mediante paneles de láminas y relectura de extendidos. Resultados Los resultados de un panel posterior al curso mostraron que 70% de los participantes cometieron errores falsos positivos bajos (FPB). Dos paneles posteriores evidenciaron que los FPB disminuían significativamente (prueba de Chi cuadrado, p<0.05) a medida que el entrenamiento avanzaba. El procesamiento de al menos tres extendidos/ día se asoció con desempeño aceptable. Durante el período a ciegas, la relectura de láminas evidenció que la sensibilidad (96,8%) y especificidad (99,8%) fueron satisfactorias. Conclusiones Una capacitación moderada (curso de tres días) no es suficiente para adquirir competencia en MF-LED; sin embargo, se puede alcanzar habilidad después de una corta capacitación «in situ¼, incluso si no hay personal con experiencia disponible en el servicio para revisar los resultados dudosos diariamente. El entrenamiento fue más efectivo en servicios con carga de trabajo mínima de 750 extendidos/año.(AU)

Performance of LED fluorescence microscopy for the detection of acid-fast bacilli from respiratory samples in peripheral laboratories in Argentina / Rendimiento de la microscopía de fluorescencia LED para la detección de bacilos ácido-alcohol resistentes en muestras respiratorias en laboratorios periféricos de Argentina

ABSTRACT Introduction: Light-emitting diode fluorescence microscopy (LED-FM) has been endorsed by the World Health Organization (WHO) for tuberculosis diagnosis, but its accuracy in HIV-infected patients remains controversial, and only some few studies have explored procedural factors that may affect its performance. Objective: To evaluate the performance of LED-FM for tuberculosis diagnosis in patients with and without HIV infection using a newer, less expensive LED lamp. Materials and methods: We compared the performance of LED-FM and Ziehl-Neelsen (ZN) microscopy on respiratory specimen smears from tuberculosis (TB) suspects and patients on treatment examined by different technicians blinded for HIV-status and for the result of the comparative test. We analyzed the effect of concentrating specimens prior to microscopy using different examination schemes and user-appraisal of the LED device. Results: Of the 6,968 diagnostic specimens collected, 869 (12.5%) had positive Mycobacterium tuberculosis cultures. LED-FM was 11.4% more sensitive than ZN (p<0.01). Among HIV-positive TB patients, sensitivity differences between LED-FM and ZN (20.6%) doubled the figure obtained in HIV-negative patients or in those with unknown HIV status (9.3%). After stratifying by direct and concentrated slides, the superiority of LED-FM remained. High specificity values were obtained both with LED-FM (99.9%) and ZN (99.9%).The second reading of a sample of slides showed a significantly higher positive detection yield using 200x magnification (49.4 %) than 400x magnification (33.8%) (p<0.05). The LED-device had a very good acceptance among the technicians. Conclusion: LED-FM better performance compared with ZN in HIV-infected patients and user-appraisal support the rapid roll-out of LED-FM. Screening at 200x magnification was essential to achieve LED-FM increased sensitivity.

RESUMEN Introducción. La microscopía de fluorescencia con lámpara LED (MF-LED) ha sido recomendada por la Organización Mundial de la Salud (OMS) para el diagnóstico de la tuberculosis, pero su precisión en pacientes con HIV continúa siendo controversial y en pocos estudios se han explorado los factores metodológicos que pueden afectar su utilidad. Objetivo. Evaluar el rendimiento de la MF-LED en el diagnóstico de la tuberculosis en pacientes con HIV y sin él mediante un novedoso dispositivo LED. Materiales y métodos. Se comparó el rendimiento de la MF-LED y la microscopía en frotis de muestras respiratorias con tinción de Ziehl-Neelsen (M-ZN) examinados por técnicos cegados en cuanto al estado de HIV y el resultado de la prueba comparativa. Se analizó el efecto de concentrar muestras antes de la microscopía, usar diferentes esquemas de observación y la valoración con el dispositivo LED. Resultados. De las 6.968 muestras recolectadas, 869 (12,5 %) resultaron con cultivo positivo para Mycobacterium tuberculosis. La MF-LED fue 11,4 % más sensible que la M-ZN (p<0,01). Entre los pacientes con tuberculosis positivos para HIV, la diferencia de sensibilidad entre la MF-LED y la M-ZN (20,6 %) duplicó la cifra obtenida en pacientes negativos para HIV o con estatus desconocido (9,3 %). Al estratificar los frotis en directos y concentrados, se mantuvo la superioridad de la MF-LED. Las especificidades de la MF-LED (99,9 %) y la M-ZN (99,9 %) resultaron elevadas. La lectura de una muestra de frotis mostró una positividad significativamente mayor con un aumento de 200X (49,4 %) que con uno de 400X (33,8 %) (p<0,05). El dispositivo LED tuvo una buena aceptación entre los técnicos. Conclusión. Debido al mejor desempeño de la MF-LED comparada con la M-ZN en pacientes con HIV y su fácil utilización, se recomienda su adopción. La utilización del aumento de 200X fue esencial para el incremento de la sensibilidad de la MF-LED.